荧光显微镜的历史

弗雷德里克·赫歇尔在1845年发现了荧光。他观察到紫外线可以激发奎宁溶液，导致蓝光的发射。乔治·g·斯托克斯爵士以这个观察为基础，注意到荧光发射的波长比最初用来激发它们的紫外光更长。20世纪初，荧光团首次被用于生物研究的组织、细菌和其他病原体染色。卡尔蔡司和卡尔赖歇特后来把这些观察结果发展成荧光显微镜。

Ellinger和Hirt早在20世纪40年代早期就开发了荧光标记技术，但直到20世纪90年代才实现了绿色荧光蛋白(GFP)的克隆。然而，一旦它被发现，它在荧光显微镜中的应用就立即固化了。

荧光技术如何发展

由于对各种物质的激发和发射特性进行了大量的实验和研究，所以荧光显微镜可以以一种非常可控的方式应用。现在的结果相当可靠，而且非常详细。

在早期荧光显微术中，针孔孔径的引入使光束路径的分辨率大大提高。一个加在光源前面，第二个加在探测器前面。这些针孔有助于聚焦光-发射和激发-它们的使用被称为双聚焦系统。这种技术导致了现代共聚焦显微镜的发展。

在共聚焦显微镜上的进一步发展是旋转圆盘显微镜，它减少了图像采集时间和样品在激光照射下的曝光时间。激光通过一个包含多个针孔孔径的旋转圆盘，同时照亮样本上的几个点，增加可能的帧率。

f光子显微镜是荧光显微镜的另一种变体，它同时吸收两个光子，而不是一个。这使激发波长增加到比发射波长高的一点。

双光子显微镜不会产生出焦点外的光，减少了光漂白和其他光相关损伤的机会和风险。

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来源:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6325693/
https://www.britannica.com/biography/Sir-George-Gabriel-Stokes-1st-Baronet